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  • 为什么选择脱落细胞中的RNA作为检测对象?
     

    病毒在宿主细胞内进行繁殖就必须要表达其所需的相关蛋白,因为蛋白的合成必须由RNA进行翻译得来。无论感染的是DNA病毒还是RNA病毒,被侵染的细胞中就会存在病毒RNA

    患者在用药之后,病原体死亡,RNA随之降解,所以RNA检测是活菌检测,可以帮助临床对治疗效果进行评估。因此以RNA为检测靶标能更好的反应病原体在体内的存活情况。已有一些文献报道在某些感染治愈患者体内仍能用pcr的方法检测到病原菌的DNA,这说明DNA靶标不能很好的反应病原体在体内的存活情况。

  • 产品检测的目的物是RNA,RNA容易降解,是否对检测结果有影响?
     

    从理论上来说会造成一定的影响,但是如果在实验操作过程中严格按照操作规程来进行实验,并且设立专门用于进行T7 RNA恒温扩增的区域,则可将RNA降解的影响降至最低。

  • 多生物素信号放大检测时,需要将扩增产物开盖检测,是否会引起污染?
     

    大家进行过相关测试:整板进行阳性质控物的杂交检测,将微孔板上方盖上一个扣板,放入42℃进行杂交反应。反应结束后,扣板上会有微量的水蒸气。将水蒸气收集进行双扩增检测(扩增+杂交),无对应阳性信号。说明杂交反应蒸发产生的水汽中无或者仅有及其微量的RNA产物,不会影响后续其他双扩增反应,更不会影响杂交反应。

  • 必赢的官网网址星产品使用中是否会产生气溶胶污染?
     

    RNADNA一样会产生气溶胶现象,但是暴露在外界环境中,DNA不易降解,因为DNA酶不稳定;而RNA很容易降解,因为RNA酶可以稳定的存在于外界环境中。所以,即使RNA会产生气溶胶,它也会迅速降解,不会污染后续检测过程。

  • 产品操作中是否容易造成污染?包括对实验室环境的污染、样本交叉污染等?
     

    本产品的扩增产物是病原体的RNA ,在环境中极易降解,因此在操作中造成污染的可能性很小。

  • 反应中产生的cDNA会不会造成污染?
     

    反应过程中产生的cDNA在扩增结束后总含量很少,只相当于一个病原体的DNA量(104)。 而PCR则不同,PCR扩增结束后DNA量数量级可达到1012,甚至更高,所以会产生污染,所以本方法T7扩增中形成的cDNA量不足以造成污染。

  • 双扩增检测部分为开放性检测,是否会造成污染?
     

    实验操作过程中不易造成污染,本技术在T7扩增时产物为RNARNA很容易被RNA酶降解。而且大家知道RNA酶随处可见、稳定,所以不会像DNA一样容易形成气溶胶污染样本扩增。

  • 必赢的官网网址星使用中用到哪些仪器设备?耗材?
     

    1. 仪器

    样本处理阶段

    涡旋振荡器

    高速台式离心机

    T7 RNA恒温扩增阶段

    生物安全柜

    PCR仪(或者干式加热器)

    多生物素信号放大检测阶段

    手工操作:恒温箱

    自动洗板机(可选)

    水平脱色摇床(可选)

    化学发光仪

    仪器操作:全自动化学发光分析仪

    2. 耗材

    样本采集阶段

    一次性尼龙植绒咽拭子

    样本采集管

    样本保存液(灭菌生理盐水、灭菌PBS、病毒保存液)

    样本处理阶段

    (无DNase/RNase酶)

    1.5mL离心管

    吸头(200 uL1000 uL

    T7 RNA恒温扩增阶段

    (无DNase/RNase酶)

    滤芯吸头(10 uL20 uL

    多生物素信号放大检测阶段

    手工操作:1.2mL样品管

              0.2mLPCR 8联管

    吸头(10uL200 uL1000 uL

    仪器操作:96孔深孔板

    3. 其他:单通道移液器,多通道移液器。

  • 产品试验操作对实验环境有什么要求(是否需要PCR试验室,是否需要分区)?
     

    本产品的操作步骤主要分为T7 RNA恒温扩增和杂交信号放大两个阶段。由于在T7 RNA恒温扩增时主要检测的是样本裂解液中的RNARNase非常稳定,是导致RNA降解最主要的物质。它广泛存在于人的皮肤上,而且用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能使RNase完全失活。因此,建议专门划分一个单独的区域进行T7 RNA恒温扩增,在操作时必须戴手套和口罩。一般情况下可采用RNase清除剂擦洗实验台面和移液器,尽量使用无RNase的一次性塑料实验耗材,玻璃制品则可以在140℃烘烤3个小时。这样能最大限度的减少RNase降解样本RNA 的风险。

  • 双扩增技术与PCR技术的区别?
     

    双扩增法是指将T7 RNA恒温扩增技术与多生物素信号放大技术结合在一起的一种检测方法。

    不同于传统的PCR技术,本产品所采用的T7 RNA恒温扩增技术在42℃恒定温度条件下进行反应,其扩增产物是RNA。每个循环大概可以扩增产生1001000RNA拷贝,扩增效率高,在30分钟之内即可得到109RNA拷贝。

    此外,T7扩增是RNA扩增而PCR进行DNA扩增,由于RNA在实验室环境中比DNA更容易降解,因此可以减少实验室污染。

    第三,由于扩增温度不需要改变因此无需PCR仪,完成反应速度更快。

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