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双扩增法的原理是什么?简单先容一下

 

双扩增法是指将T7 RNA恒温扩增技术与多生物素信号放大技术结合在一起的一种检测方法。

T7 RNA恒温扩增技术不同于PCR扩增,T7 RNA恒温扩增可以在逆转录酶和T7 RNA聚合酶的作用下,经过逆转录和转录过程实现病原体RNA的核酸扩增。

多生物素信号放大技术利用不同检测靶标的特异探针和多生物素标记的放大探针,将捕获的靶标信号放大,提高了检测的灵敏度。扩增后的RNA产物加入到包被有捕获探针的微孔中进行杂交,同时加入该捕获探针对应的特异探针。微孔中的捕获探针可与RNA产物结合使其锚定到微孔中;特异探针的一端可结合到RNA产物上,另一端与下一步加入的生物素标记的放大探针结合,实现信号放大过程。标记有多生物素的放大探针随后与链霉亲和素-HRP酶联物结合,最终形成捕获探针-RNA扩增产物-特异探针-放大探针-链霉亲和素-HRP酶联物复合体,最后加入HRP酶化学发光底物,在化学发光仪上进行检测。

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